Tanaman sagu (Metroxylon sagu Rottb.) biasanya diperbanyak Secara vegetatif Artikel Baru tuna Anakan. Namun, terbatasnya ketersediaan Anakan ikan tuna Yang merupakan seragam hambatan Utama KESAWAN pembukaan Anak perusahaan Subsidiaries sagu. Teknologi mempunyai kultur Jaringan Potensi untuk perbanyakan klonal Tanaman sagu KESAWAN Unggul SKALA Besar. Kultur in vitro Tanaman Canada telah dikembangkan sagu embriogenesis somatik. Kalus embriogenik Yang Dari eksplan berasal pucuk tuna Anakan dikulturkan PADA medium Murashige modifikasi dan Skoog (MMS) Artikel Baru sukrosa 30 g / L, gelrite 2 g / L, arang Aktif 1 g / L, 2,4-D 5 mg / L kinetin dan 0,1 mg / L untuk menginduksi embrio somatik.
Kalus membentuk embrio somatik KESAWAN julian Empat Minggu. KESAWAN kultur berikutnya, Dari Kurang-lebih 0,3 g embrio fase globuler Yang dikulturkan PADA media MMS kinetin Artikel Baru 1,0 mg / L, ABA 0,01 mg / L dan GA3 0,1 mg / L menghasilkan 140 Sampai 200 embrio somatik Artikel Baru Yang fase perkembangan berbeda-beda.
Embrio somatik KESAWAN * Semua fase perkembangan dengan ukuran dan warna berbeda-beda Yang Saat ditemukan terkait masih berlangsung KESAWAN kultur. Di samping itu, embriogenesis somatik sekunder (berulang) Juga terjadi KESAWAN sagu kultur. Embrio somatik Dewasa fase Bila dipindah ke media padat Artikel Baru garam makro dan setengah konsentrasi PADA konsentrasi sukrosa 20 atau 30 g / L Tanpa zat pengatur Tumbuh akan menjadi planlet normal. Kelapa Sagu (Metroxylon sagu Rottb.) adalah biasanya disebarkan vegetatif dengan pengisap.
Namun, terbatasnya ketersediaan seragam pengisap merupakan hambatan utama dalam pendirian perkebunan sagu dibudidayakan. kultur jaringan telah potensi massa skala besar klonal propagasi genotipe unggul kelapa sagu. Dalam kultur in vitro sagu telah dibentuk melalui embriogenesis somatik. Embriogenik kalus yang berasal dari jaringan tunas apikal muda pengisap dikultur pada Murashige dimodifikasi dan Skoog (MMS) medium yang mengandung 30 g / L sukrosa, 2 g / L gelrite, 1 g / L arang aktif, 5,0 mg / L 2,4-D, dan 0,1 mg / L kinetin untuk mendorong embrio somatik. rumpun Kalus terbentuk somatik embrio dalam waktu empat minggu.
Dalam selanjutnya budaya, kira-kira 0,3 g awal bulat kalus ditanam pada medium yang mengandung 1,0 MMS mg / L kinetin, 0,01 mg / L ABA dan 0,1 mg / L GA3 menghasilkan 140 sampai 200 embrio somatik pada waktu yang berbeda tahap perkembangan empat minggu kemudian. Semua tahap embrio berkembang dengan berbagai ukuran dan warna yang hadir pada satu waktu dari budaya. Sekunder (berulang) somatik embriogenesis juga ditemukan dalam budaya. Mentransfer dari tahap dewasa somatik embrio untuk padat disajikan di The Simposium Sagu Internasional ke-8, 4-6 Agustus 2005, Jayapura, Papua, Indonesia.
garam makro media dengan setengah kekuatan dan dengan sukrosa pada konsentrasi 20 atau 30 g / L tanpa pengatur tumbuh menyebabkan perkembangan plantlet normal.
[Kata kunci: Embrio pematangan, Metroxylon sagu, regenerasi plantlet, sagu sawit,] embriogenesis somatik. kelapa Sagu (Metroxylon sagu Rottb.) adalah merupakan makanan pokok bagi rakyat Indonesia terutama di bagian timur kepulauan. Pati sagu telah digunakan untuk produksi mie, roti putih, sirup fruktosa tinggi, filler biodegradable plastik, pakan, hewan perekat, etanol dan derivatif banyak produk lainnya (Flach, 1997). Sagu sawit memiliki banyak keunggulan atas tanaman pati-produsen lain terutama untuk hasil yang lebih tinggi (15-25 ton kering pati / ha / tahun), bisa tumbuh di sepanjang pinggir sungai dan di daerah rawa di mana tidak cocok untuk tanaman lain dan tidak perlu ditanam kembali teratur (Flach, 1997).
Sagu sawit menyebar vegetatif oleh pengisap dan secara generatif dengan biji. Biji produksi jarang terjadi karena telapak tangan adalah umumnya dipanen dengan memotong pohon saja sebelum berbunga. Untuk menentukan skala besar perkebunan, ketersediaan seragam pengisap merupakan kendala utama (Jong, 1995).
Selain itu, bobot yang baik berukuran pengisap yang 2 sampai 5 kg (Rostiwati et al., 1999) membuat mereka lebih sulit dalam mereka transportasi. Kultur jaringan telah dilakukan untuk perbanyakan vegetatif telapak tangan seperti minyak kelapa sawit (Duval et al, 1993;.. Rival et al, 1997), kelapa (Chan et al, 1998;. Fernando & Gamage, 2000), dan kurma (Omar & Novak, 1990; Huong et al, 1999).. Namun, hanya beberapa studi telah melaporkan tentang kultur jaringan pohon sagu (Hisajima et al, 1991;. Tahardi et al, 2002.).
Kultur jaringan pohon sagu telah ditetapkan melalui embriogenesis somatik, dimana awal pengembangan somatik embrio telah dicapai oleh kultur menembak jaringan apikal sebagai eksplan pada dimodifikasi MS medium yang mengandung tinggi konsentrasi 2,4-D dan 1 mg / L kinetin (Tahardi et al, 2002.). Somatik embriogenesis dipilih karena potensinya untuk menghasilkan berlimpah seragam bahan tanam unggul (Handayani, 1995). Dalam makalah ini, terakhir kemajuan pekerjaan kami dalam kultur jaringan sagu dilaporkan terutama di induksi dan pematangan somatik embrio sampai pembentukan plantlet pada padat media.
Bahan dan Metode
Tanaman bahan dan kondisi kultur Penelitian telah dilakukan di Laboratorium Budaya Plant Cell dan Mikropropagasi, Bioteknologi Indonesia Balai Penelitian Tanaman Perkebunan, Bogor, Jawa Barat. Nodular embriogenik kalus telah digunakan sebagai bahan untuk penelitian. Kalus yang dimulai dari jaringan pucuk apikal anakan muda fieldgrown sagu sawit di kabupaten Parung, Barat Jawa. Eksplan dikulturkan pada dimodifikasi MS (Murashige & Skoog, 1962) media (MMS) menurut Tahardi et al.
Perkembangan embrio somatik sagu ... (2002) untuk memulai kalus embriogenik. The pH semua media telah disesuaikan menjadi 5,7 sebelum autoklaf pada 1210C dan 1,0 kg/cm2 selama 20 min. Semua kultur diinkubasi dalam budaya kamar di suhu 250C di bawah lampu neon putih dingin menyediakan sekitar 30 ìmol foton / m2 / s atas penyinaran 14-h.
Induksi embrio somatik Kalus embriogenik dikultur pada media padat ditambah MMS dengan 30 g / L sukrosa, 1 g / L diaktifkan arang 0,1 mg / L kinetin dan berbeda konsentrasi-trations dari 2,4-D: 0, 5 atau 10 mg / L. Gelrite sebesar 2 g / L digunakan sebagai pembentuk gel. Empat gumpalan kalus ditempatkan pada 40 mL padat menengah di setiap stoples kultur dengan sepuluh ulangan. Budaya ditempatkan di ruang kultur selama empat minggu. Pada akhirnya eksperimen, frekuensi embrio formasi ditentukan. Pematangan embrio somatik Somatik embrio pada awal perkembangan tahap, kebanyakan berbentuk bulat, yang dikulturkan pada medium padat yang mengandung MMS setengah-kekuatan makro garam, 2 g / L gelrite, 30 g / L sukrosa, 1 g / L arang aktif, 0,01 mg / L ABA, 0,1 mg / L GA3, dan sitokinin yang berbeda tingkat: 1, 2 dan 4 mg / L BAP atau kinetin. Empat rumpun dari embrio ditempatkan di 40 mL solid menengah di setiap stoples budaya dengan lima ulangan. Jumlah berat basah dan berat biomassa nomor setiap tahap embrio diamati di awal dan akhir percobaan (empat minggu budaya).
Plantlet konversi
Menghasilkan embrio somatik umumnya terjadi pada tahap kotiledon dipilih dan dikultur pada media MMS padat dengan penuh atau garam setengah-kekuatan makro dan 20 atau 30 g / L sukrosa, tanpa pertumbuhan tanaman regulator. Empat rumpun embrio dikultur pada medium padat 40 mL masing-masing stoples budaya dengan lima kali ulangan untuk empat minggu. Total biomassa berat segar dan jumlah masing-masing tahap embrio yang diamati pada awal percobaan. Setelah empat minggu budaya segar berat embrio total, jumlah plantlet, dan panjang tunas dan akar ditentukan. Analisis statistik Data dikenakan cara dua analisis uji varians (uji F) setelah tepat transformasi jika diperlukan. Perbedaan antara berarti perlakuan ditentukan oleh Duncan multiple range test pada P = 0,05.
Hasil dan Diskusi
Induksi embrio somatik kalus embriogenik sagu putih dan lembut terdiri dari banyak kecil nodular struktur (Gambar 1A). Embriogenik kalus sagu mulai membentuk embrio somatik di sepuluh hari setelah kultur. Beberapa putih kalus berubah menjadi putih atau kekuningan sebagian besar kehijauan dengan struktur padat disebut globular embrio somatik.
Semua kalus rumpun menghasilkan embrio somatik pada media setelah empat minggu budaya. Penambahan 2,4-D sebesar 10 mg / L menurunkan frekuensi pembentukan embrio somatik. Pada media tanpa 2,4-D hanya beberapa dari rumpun kalus embrio terbentuk dan pembentukan embrio telah tertunda lebih dari satu minggu. Auksin 2,4-D dalam konsentrasi tinggi memiliki umum digunakan untuk memulai kalus dari eksplan spesies kelapa termasuk sagu sawit (Tahardi et al, 2002.). Namun, kalus harus ditransfer ke media dengan bertahap penurunan tingkat 2,4-D ke awal level seperti dalam kelapa (Chan et al, 1998.; Fernando & Gamage, 2000) dan tanggal sawit (Huong et al., 1999) untuk mendorong somatik embriogenesis. Dalam studi ini, ditemukan bahwa 2,4-D 5 mg / L dikombinasikan dengan 0,1 mg / L kinetin dipromosikan frekuensi induksi embrio somatik.
Pematangan embrio somatik
Ada sekitar 80 somatik kebanyakan embrio pada tahap globular ketika budaya dimulai. Empat minggu kemudian, total jumlah embrio meningkat menjadi 140 - 200 embrio pada perkembangan yang berbeda tahap pada media MMS padat dengan 0,01 mg / L ABA, 0,1 mg / L GA3 dan BAP atau kinetin pada 1, 2, 4 mg / L (1C Gambar, Tabel 2). Ini berarti bahwa embrio somatik baru telah terbentuk selama budaya. Ini embrio baru disebut sekunder (berulang) somatik embrio. Beberapa embrio tumbuh lebih lanjut ke kemudian perkembangan tahap, sedangkan embrio lainnya menunjukkan kecenderungan embriogenesis berulang oleh tunas dari embrio globular baru. Oleh karena itu, semua tahap pengembangan embrio dengan berbagai ukuran dan warna hadir pada satu waktu lebih dari satu bagian dari budaya. embriogenesis sekunder ditemukan di banyak kayu tanaman lainnya seperti kurma (Huong et al., 1999) dan teh (Akula & Dodd, 1998; Sumaryono et al, 2001).. Selama proses pematangan, somatik embrio dari sagu telah berubah dalam bentuk, ukuran, dan warna. Pada tahap perkembangan awal bentuk embrio dari sagu yang bulat atau globular kekuningan atau kehijauan putih di warna kemudian berbalik kuning kemerahan atau hijau diperkembangan embrio somatik sagu.
Embriogenesis somatik dan pembentukan planlet kelapa sagu. (A) embriogenik kalus, (B) Tahap awal embrio somatik, (C) Sebuah rumpun embrio somatik Perkembangan berbagai tahap, (D) perkembangan embrio somatik dari bulat untuk germinants, (E) Plantlet. Gambar 1. Embriogenesis somatik dan pemBentukan planlet Tanaman sagu. (A) kalus embriogenik, (B) Fase akhir embrio somatik, (C) Kumpulan embrio somatik KESAWAN berbagai fase perkembangan, (D) Perkembangan embrio somatik Dari Sampai globuler kecambah, (E) Planlet. kemudian perkembangan tahap. Bentuk embrio telah diubah secara bertahap dari bulat ke jantung-bentuk, torpedo, kotiledon dan awal germinant mengikuti perkembangan embrio Pola dijelaskan oleh Arnold et al. (2002). Tidak seperti tanaman lain, merah cerah dan warna hijau yang dominan di somatik embrio sagu. Sitokinin aplikasi terpengaruh secara signifikan jumlah total embrio somatik. BAP pada 2 dan 4 mg/L dan kinetin pada 1 dan 2 mg / L memberikan angka yang lebih tinggi embrio daripada tanpa sitokinin. Jika hanya jumlah embrio somatik pada tahap dewasa atau embrio berkecambah adalah dipertimbangkan, kinetin pada 1 mg / L adalah yang terbaik pengobatan untuk pematangan embrio. Hasil ini mirip dengan pematangan embrio teh dilaporkan oleh Tahardi et al. (2000).
Peningkatan konsentrasi kinetin cenderung menurunkan jumlah dewasa embrio. Fenomena ini bisa disebabkan oleh ketersediaan tinggi sitokinin endogen sehingga kini sitokinin eksogen bisa menghambat pematangan embrio.
Meskipun embrio berkecambah lebih ditemukan pada medium dengan 1 mg/L kinetin, embrio dilakukan lebih kecil daripada dari pada medium tanpa sitokinin atau dengan 2 mg / L BAP. BAP telah digunakan untuk somatik embrio dalam beberapa telapak tangan. Dalam kelapa sawit BAP pada 5 dan 10 pM adalah yang terbaik untuk embrio pematangan pada medium padat yang dirangsang pengembangan menembak tetapi akar menghentikan pengembangan (Duval et al, 1993.). The tunas kelapa sawit harus ditransfer ke rooting medium yang mengandung auksin. Aberlenc-Bertossi et al. (1999) menemukan bahwa penambahan BAP selama embrio pengembangan kelapa sawit diinduksi apeks pucuk diferensiasi sehingga meningkatkan perkecambahan tarif hingga 70%.
Hasil yang sama ditemukan dalam kurma pembangunan dimana embrio dipromosikan oleh kombinasi BAP dan kinetin (Huong et al, 1999.). Chan et al. (1998) mencapai embrio Matura-tion dalam kelapa dengan mengurangi konsentrasi-trasi sipil dari 2,4-D dari 100 pM ke 1 pM dan penambahan BAP pada 50 pM.
Plantlet konversi Plantlet konversi dicapai pada media dengan makro setengah kekuatan dan sukrosa baik di 20 atau 30 g/L. Pada rata-rata ada 12-13 plantlet per jar pada menengah dengan makro setengah kekuatan. Halfstrength macro juga memberikan nyata segar lebih tinggi berat badan, panjang tunas dan akar dibandingkan dengan makro penuh kekuatan. Konsentrasi 20 sukrosa dan 30 g / L tidak mempengaruhi berat segar.
Perkembangan embrio somatik sagu ...
Sebagian besar tunas plantlet dan akar, kadang-kadang lebih dari satu akar. Plantlet ini siap ditransfer pada media padat untuk lebih lanjut pertumbuhan. Hasil yang sama diperoleh pada minyak sawit mana yang paling berkembang menjadi embrio lengkap dan normal plantlet setelah subkultur ke setengah-kekuatan MS tanpa pengatur pertumbuhan tanaman (Teixeira et al., 1995). Hasil yang sama ditemukan di somatik embriogenesis teh dimana menggunakan setengah-kekuatan garam makro meningkat signifikan konversi somatik embrio ke plantlet (Tahardi et al, 2000.). pengatur pertumbuhan tanaman tak punya sanggahan telah umum telah digunakan untuk pengembangan lebih lanjut embrio somatik menjadi planlet.
Sumber
Klasifikasi Macam - macam Tumbuhan